彼は 1535 年に 3 隻の船で戻り、1535 年から 1536 年の冬をスタダコナ (現在のケベックシティ近く) で過ごし、そこで酋長ドンナコナ率いるセントローレンスのイロコイ族と知り合いました。カルティエはドンナコナと部族民11人を誘拐してフランスに連れて行き、そこで数名が病気で死亡した。他の人たちは1536年に戻ったが、その後すぐに死亡した。
オチェラガ (現在のモントリオール) で、カルティエは別のイロコイ族に会い、ラシーヌ急流を見ました。これらの部族はカルティエにカヌーの使用をもたらし、探検家や毛皮商人によるさらなる内陸進出を可能にしました。